- Der ELISA-Test (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) ist ein Nachweisverfahren (Assay).
- Wissenschaftler können damit Proteine (z. B. Antikörper) und Viren, aber auch Hormone, Toxine und Pestizide in einer Probe (Blutserum, Milch, Urin, etc.) nachweisen.
- Genutzt wird die Eigenschaft spezifischer Antikörper, die an der gesuchten Struktur binden.
- Der Nachweis erfolgt durch Farbumschlag, ähnlich einer Indikatorreaktion.
Markerenzym – Meerrettichperoxidase
- Um die Bindung des Antikörpers an die gesuchte Struktur sichtbar zu machen, nutzt man Enzyme, die aus einem farblosen Substat (Chromogen) ein farbiges Produkt katalysieren.
- Durch den Farbumschlag wird die Anwesenheit der gesuchten Struktur angezeigt.
- Das Enzym ist mit einem Antikörper (= Detektor – Antikörper) verbunden.
Bestandteile
- Detektor – Antikörper
- hat eine spezifische Bindungstellen für das gesuchte Antigen
- ist mit dem Markerenzym verbunden
- Markerenzyme
- Enzyme, die aus einem farblosen Chromogen (Substrat) ein farbiges Produkt katalysieren
- Antigen
- gesuchte Struktur (Protein, Virus usw.)
- Fänger – Antikörper
- hat ebenfalls spezifische Bindungstellen für das gesuchte Antigen
- bindet an die Platte
- Platte
- ist mit einem Material („Klebeband für Antikörper)“ beschichtet, das in der Lage ist. die Fänger – Antikörper zu binden
Adsorption: Anreicherung von Gasen oder Flüssigkeiten an festen Oberflächen
Inkubation: Einwirken lassen von Enzymen, Antikörpern usw. auf Substrate
Verlauf ELISA – Test
- Adsorption der Fänger – Antikörper
- binden an der Platte
- Waschen
- nicht gebundene Antikörper werden entfernt
- Inkubation mit Antigen
- Zugabe der Probe mit dem gesuchten Antigen
- Wasche
- nicht gebundene Antigene werden entfernt
- Inkubation mit peroxidase-markierten Antigen (Detektor – Antigen)
- Waschen
- nicht gebundene Antikörper werden entfernt
- Zugabe Chromogen
Auswertung
- Farbumschlag zeigt Anwesenheit des gesuchten Moleküls an
- kein Farbumschlag, das gesuchte Molekül ist nicht vorhanden