{"id":2042,"date":"2020-06-06T09:32:41","date_gmt":"2020-06-06T07:32:41","guid":{"rendered":"http:\/\/bioclips.info\/?page_id=2042"},"modified":"2021-03-20T16:44:36","modified_gmt":"2021-03-20T15:44:36","slug":"scheren-und-kleber","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/bioclips.info\/?page_id=2042","title":{"rendered":"Scheren und Kleber"},"content":{"rendered":"\n<h2 class=\"wp-block-heading\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" width=\"25\" height=\"25\" class=\"wp-image-962\" style=\"width: 25px;\" src=\"https:\/\/bioclips.info\/wp-content\/uploads\/2018\/12\/cropped-favicon.jpg\" alt=\"\" srcset=\"https:\/\/bioclips.info\/wp-content\/uploads\/2018\/12\/cropped-favicon.jpg 512w, https:\/\/bioclips.info\/wp-content\/uploads\/2018\/12\/cropped-favicon-150x150.jpg 150w, https:\/\/bioclips.info\/wp-content\/uploads\/2018\/12\/cropped-favicon-300x300.jpg 300w, https:\/\/bioclips.info\/wp-content\/uploads\/2018\/12\/cropped-favicon-270x270.jpg 270w, https:\/\/bioclips.info\/wp-content\/uploads\/2018\/12\/cropped-favicon-192x192.jpg 192w, https:\/\/bioclips.info\/wp-content\/uploads\/2018\/12\/cropped-favicon-180x180.jpg 180w, https:\/\/bioclips.info\/wp-content\/uploads\/2018\/12\/cropped-favicon-32x32.jpg 32w\" sizes=\"(max-width: 25px) 100vw, 25px\" \/> Worum gehts?<\/h2>\n\n\n\n<p>Restriktionsenzyme sind das Werkzeug der Molekularbiologen, mit dem sie punktgenau DNA zerschneiden k\u00f6nnen. Wie diese Scheren arbeiten, wird hier besprochen.<\/p>\n\n\n\n<p>Nach dem Schneiden muss wieder alles zusammengef\u00fcgt werden. Hier kommen&nbsp;Ligasen&nbsp;zum Einsatz.<\/p>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Retriktionsenzyme die Scheren<\/h2>\n\n\n\n<ul><li>Restriktionsendonucleasen (Restriktasen)<\/li><li>Bakterien sch\u00fctzen sich damit gegen Bakteriophagen<\/li><li>Restriktasen zerschneiden normalerweise Viren-DNA<\/li><\/ul>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Das Enzym EcoRI<\/h3>\n\n\n\n<div class=\"wp-block-image\"><figure class=\"aligncenter size-large\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" width=\"435\" height=\"120\" src=\"https:\/\/bioclips.info\/wp-content\/uploads\/2020\/06\/scheren-img1.jpg\" alt=\"\" class=\"wp-image-2046\" srcset=\"https:\/\/bioclips.info\/wp-content\/uploads\/2020\/06\/scheren-img1.jpg 435w, https:\/\/bioclips.info\/wp-content\/uploads\/2020\/06\/scheren-img1-300x83.jpg 300w\" sizes=\"(max-width: 435px) 100vw, 435px\" \/><figcaption>Vom 5\u00b4-Ende gelesen besitzen die Erkennungssequenzen die gleiche Basensequenz.<\/figcaption><\/figure><\/div>\n\n\n\n<ul><li>benannt nach dem E. coli Stamm RY 13<\/li><li>hat die Schnittstelle: &#8222;GAATTC&#8220; und zwar zwischen G und A<\/li><li>am komplement\u00e4ren Strang (CTTAAG) spaltet Eco RI auch zwischen A und G<\/li><li>viele Restriktasen zerschneiden die DNA an bestimmten Basenpaaren<\/li><\/ul>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Erkennungssequenzen sind Palindrome<\/h3>\n\n\n\n<ul><li>Bei den Erkennungssequenzen handelt es sich in der Regel um Palindrome wie &#8222;OTTO, stets, Regallager oder Reliefpfeiler&#8220;.<\/li><li>Das sind Zeichenketten, die von vorn und von hinten den gleichen Begriff ergeben.<\/li><\/ul>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Die klebrigen Enden &#8211; &#8222;sticky ends&#8220;<\/h3>\n\n\n\n<ul><li>Die zerschnittene DNA zerf\u00e4llt bei niedriger Temperatur nicht in zwei Teile, weil die \u00fcberstehenden Enden lose aneinander kleben, sogenannte klebrige Enden (\u201esticky ends\u201c). A und T sowie C und G der \u201esticky ends\u201c ziehen sich noch elektrostatisch an.<\/li><li>Verschiedene Enzym-Scheren erzeugen gleiche Enden.<\/li><li>Mit ATP verbrauchenden Ligasen l\u00e4sst sich die Verbindung wieder herstellen.<\/li><\/ul>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Wie Restriktionsenzyme schneiden <\/h3>\n\n\n\n<p><\/p>\n\n\n\n<div class=\"wp-block-image\"><figure class=\"aligncenter size-large\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" width=\"600\" height=\"400\" src=\"https:\/\/bioclips.info\/wp-content\/uploads\/2020\/06\/Eco-RI.jpg\" alt=\"\" class=\"wp-image-2362\" srcset=\"https:\/\/bioclips.info\/wp-content\/uploads\/2020\/06\/Eco-RI.jpg 600w, https:\/\/bioclips.info\/wp-content\/uploads\/2020\/06\/Eco-RI-300x200.jpg 300w\" sizes=\"(max-width: 600px) 100vw, 600px\" \/><\/figure><\/div>\n\n\n\n<h4 class=\"wp-block-heading\">Hpa 1 mit dem glatten Schnitt<\/h4>\n\n\n\n<p>Einige Restriktionsenzyme erzeugen glatte Schnitte (glatte Enden, blunt ends).<\/p>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Einige Enzym &#8211; Scheren erzeugen komplement\u00e4re Enden<\/h3>\n\n\n\n<ul><li>Die Restriktionsenzyme BamHI (Erkennungssequenz GGATCC) und Bg\/II (Erkennungssequenz AGATCT) lassen beide klebrige Enden mit der gleichen Sequenz GATC entstehen.<\/li><li>Die dadurch entstandenen Enden k\u00f6nnen sich verbinden und lassen sich dann mittels Ligasen \u201everkleben\u201c.<\/li><li>Ein Schneiden ist dann nicht mehr m\u00f6glich.<\/li><li>Machen Sie die Schnittstellen sichtbar und verbinden Sie die verschiedenen St\u00fccke (drug &amp; drop)<\/li><li>Nach dem Zusammenf\u00fcgen der &#8222;klebrigen Enden&#8220; geht das Palindrom verloren.<\/li><\/ul>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Die Ligase &#8211; der Kleber<\/h2>\n\n\n\n<ul><li>Die entstandenen Genfragmente, die mit zwei unterschiedlichen Restriktionsenzymen geschnitten wurden und \u00fcber komplement\u00e4re &#8222;klebrige Enden verf\u00fcgen, k\u00f6nnen mittels Ligasen verbunden werden.<\/li><li>Ein Schneiden ist anschlie\u00dfend nicht mehr m\u00f6glich, da durch das \u201eVerkleben\u201c eine Sequenz entsteht, die kein Palindrom darstellt.<\/li><\/ul>\n\n\n\n<h4 class=\"wp-block-heading\">Zusammenfassung<\/h4>\n\n\n\n<ul><li>Restriktasen und Ligasen erm\u00f6glichen das gezielte Schneiden und Verbinden von DNA-Molek\u00fclen.<\/li><li>Sie sind Scheren und Kleber der Molekulargenetik.<\/li><li>Heute sind \u00fcber 3500 Restriktionsenzyme bekannt, nur einige sind geeignet f\u00fcr die Gentechnik.<\/li><\/ul>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Worum gehts? Restriktionsenzyme sind das Werkzeug der Molekularbiologen, mit dem sie punktgenau DNA zerschneiden k\u00f6nnen. Wie diese Scheren arbeiten, wird hier besprochen. Nach dem Schneiden muss wieder alles zusammengef\u00fcgt werden. Hier kommen&nbsp;Ligasen&nbsp;zum Einsatz. Retriktionsenzyme die Scheren Restriktionsendonucleasen (Restriktasen) Bakterien sch\u00fctzen sich damit gegen Bakteriophagen Restriktasen zerschneiden normalerweise Viren-DNA Das Enzym EcoRI benannt nach dem E&#8230;.<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"parent":1190,"menu_order":3,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","template":"","meta":{"footnotes":""},"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/bioclips.info\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/pages\/2042"}],"collection":[{"href":"https:\/\/bioclips.info\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/pages"}],"about":[{"href":"https:\/\/bioclips.info\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/types\/page"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/bioclips.info\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/bioclips.info\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fcomments&post=2042"}],"version-history":[{"count":9,"href":"https:\/\/bioclips.info\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/pages\/2042\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":2575,"href":"https:\/\/bioclips.info\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/pages\/2042\/revisions\/2575"}],"up":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/bioclips.info\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/pages\/1190"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/bioclips.info\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fmedia&parent=2042"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}